QPCT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405768
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- QPCT O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico QPCT, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:QPCT Anticorpo (4E11): sc-517122
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
QPCT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405768 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
A QPCT (glutaminil-peptídeo ciclotransferase) é uma enzima secretada e associada ao complexo de Golgi que catalisa a formação de piroglutamato na extremidade N-terminal de proteínas e peptídeos, uma modificação pós-traducional que pode influenciar a estabilidade frente à proteólise, as interações com receptores e a bioatividade de peptídeos. Ao converter resíduos N-terminais de glutamina ou glutamato em piroglutamato, a QPCT contribui para a maturação proteica na via secretória e modula contextos de sinalização extracelular. Essa atividade se cruza com vias que regulam o processamento de hormônios peptídicos e neuropeptídeos, a proteostase extracelular e a secreção regulada. Alterações na piroglutamilação têm sido relacionadas na literatura à agregação proteica e a modificações de peptídeos associadas à neurodegeneração, sustentando a QPCT como um nó mecanístico para o estudo da biologia de proteoformas relevante para doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO QPCT (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene QPCT em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do QPCT, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do QPCT na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína QPCT.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de QPCT para a investigação da sinalização de QPCT, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) QPCT críticos para a função QPCT
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos QPCT para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo QPCT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo QPCT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus QPCT. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo QPCT Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR QPCT (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia QPCT para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo QPCT definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.