QKI CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405082-ACT

QKI（Quaking）はRNA結合タンパク質であり、pre-mRNAスプライシング、mRNAの安定化、核外輸送、翻訳の制御を通じて転写後の遺伝子発現を調節する。QKIは細胞運命プログラムの重要な調節因子で、特にオリゴデンドロサイトの分化と髄鞘形成において中心的な役割を担い、細胞骨格の組織化やシグナル伝達に関与するRNAレギュロンを統括する。さらにQKIは、転写産物アイソフォームの使い分けやRNAターンオーバーを形作ることで、上皮―間葉動態、アポトーシス、ストレス応答を司る経路とも連携する。QKIの発現やスプライシングの破綻は、神経発達異常や脱髄表現型と関連づけられており、RNAプロセシングの変化が異常増殖や浸潤に寄与するという観点から、がん生物学の文脈でも頻繁に研究されている。

QKI CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性QKIの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

QKI CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における QKI 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はQKI転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性QKIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のQKI遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるQKI依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびQKI発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるQKI経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。