PUMAα/β Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400464-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PUMAα/βO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PUMAα/β (h) e o Plasmídeo Double Nickase PUMAα/β (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para BBC3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PUMAα/β Anticorpo (G-3): sc-374223
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PUMAα/β Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400464-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PUMAα/β Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400464-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBC3 codifica PUMAα/β (modulador de apoptose regulado positivamente por p53), uma proteína da família BCL-2 do tipo “BH3-only” que atua como um potente iniciador da via intrínseca de apoptose mitocondrial. PUMA promove a permeabilização da membrana externa da mitocôndria ao neutralizar proteínas BCL-2 antiapoptóticas e ativar BAX/BAK, levando à liberação de citocromo c e à ativação de caspases. Sua expressão é induzida transcricionalmente por p53 em resposta a danos no DNA e a outros estresses celulares, conectando a sinalização genotóxica ao comprometimento apoptótico, e também interage com programas mais amplos de resposta ao estresse que influenciam decisões sobre o destino celular. A desregulação da sinalização de BBC3/PUMA está implicada na biologia do câncer, na neurodegeneração e em contextos de lesão tecidual em que limiares alterados de apoptose contribuem para fenótipos associados à doença.
PUMAα/β O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus BBC3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de BBC3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função BBC3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com BBC3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.