PTPζ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401775-ACT

PTPRZ1 codifica la fosfatasi tirosinica recettoriale di tipo Z1 (PTPζ), una fosfatasi di tipo recettoriale arricchita nel sistema nervoso centrale che modula gli stati di fosforilazione su tirosina alla superficie cellulare. PTPζ integra segnali extracellulari provenienti da ligandi come pleiotrofina e midkine per influenzare l’adesione cellulare, la migrazione e la crescita dei neuriti, interfacciandosi con reti di segnalazione che includono le chinasi della famiglia SRC e le vie MAPK/ERK e PI3K/AKT. Attraverso la regolazione del comportamento di cellule gliali e progenitori neurali, PTPRZ1 contribuisce a processi di sviluppo e dipendenti dall’attività nel tessuto nervoso. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di PTPRZ1 sono state associate a stati neuroinfiammatori, patologie demielinizzanti e alla biologia dei gliomi, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sulla segnalazione neurale e sulle interazioni con il microambiente.

PTPζ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTPRZ1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PTPζ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTPRZ1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTPRZ1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PTPζ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTPRZ1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PTPζ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PTPζ nelle cellule tumorali con espressione di PTPRZ1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.