PTP-MEG2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402658-ACT

PTPN9 codifica a fosfatase de tirosina proteica PTP-MEG2, um regulador citosólico da sinalização por fosfotirosina que contrabalança vias acionadas por quinases que controlam o tráfego vesicular, a secreção e a transdução de sinal proximal aos receptores. A PTP-MEG2 tem sido implicada na modulação das respostas de sinalização em células imunes e de processos responsivos a fatores de crescimento, ao desfosforilar substratos-chave em membranas e compartimentos secretores. Por meio dessas atividades, o PTPN9 influencia programas de homeostase celular, incluindo adesão, migração e sinalização metabólica. Alterações na expressão de PTPN9 ou no contexto de sinalização têm sido associadas na literatura a desregulação da sinalização inflamatória e à reconfiguração de redes oncogênicas, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico em estudos focados em vias.

PTP-MEG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPN9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTP-MEG2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPN9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPN9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTP-MEG2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPN9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTP-MEG2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTP-MEG2 em células tumorais com expressão de PTPN9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.