PTP IA-2β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404896-ACT

PTPRN2 codifica a proteína do tipo fosfatase de tirosina de receptor PTP IA-2β (também conhecida como IA-2β/phogrin), um membro cataliticamente inativo da família PTP, enriquecido nas membranas de grânulos secretórios de núcleo denso em células neuroendócrinas e nas ilhotas pancreáticas. Ela participa do tráfego vesicular regulado e da exocitose, influenciando a biogênese de grânulos secretórios, a dinâmica de liberação de hormônios/neuropeptídeos e programas de sinalização dependentes de atividade. O PTPRN2 é amplamente estudado no contexto de autoantígenos das ilhotas e da função de células endócrinas, com relevância para reconhecimento imunológico e fenótipos de secreção desregulada em pesquisas relacionadas ao diabetes. Sua expressão e funções associadas a grânulos também o tornam útil para investigar estados de diferenciação neuroendócrina e remodelamento da via secretória.

PTP IA-2β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTPRN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTP IA-2β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTPRN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTPRN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTP IA-2β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTPRN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTP IA-2β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTP IA-2β em células tumorais com expressão de PTPRN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.