PTH-rP Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422491-ACT

O gene **Pthlh** de camundongo codifica a proteína relacionada ao hormônio da paratireoide (**PTH-rP**), um regulador secretado e de ação local do crescimento e da diferenciação celular, que sinaliza principalmente por meio do **PTH1R** para ativar vias dependentes de **cAMP/PKA** e de **PLC**. A PTH-rP influencia o desenvolvimento ósseo endocondral, o acoplamento osteoblasto–osteoclasto e a biologia do músculo liso e da glândula mamária, com papéis adicionais nas interações epitélio–mesênquima durante a organogênese. Em tecidos adultos, a PTH-rP contribui para a homeostase do cálcio, a remodelação tecidual e respostas de mecanotransdução. A expressão desregulada de **Pthlh** tem sido associada a padrões esqueléticos anormais, alterações na renovação óssea e sinalização parácrina associada a tumores, relevante para estudos do microambiente ósseo.

PTH-rP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pthlh sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTH-rP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pthlh em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pthlh, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTH-rP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pthlh nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTH-rP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTH-rP em células tumorais com expressão de Pthlh silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.