PTEN CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400103-ACT

PTENは脂質およびタンパク質ホスファターゼをコードし、PIP3を脱リン酸化することでPI3Kシグナル伝達に拮抗し、その結果としてAKTの活性化および下流のmTOR依存的な増殖プログラムを抑制します。この作用を通じて、PTENは細胞周期の進行、代謝、生存、遊走を制御し、ゲノム安定性と組織恒常性の維持にも寄与します。PTENの機能は上皮の極性や細胞骨格ダイナミクスを制御する経路とも統合され、接着性や浸潤性といった挙動に影響を及ぼします。PTENの発現や活性の異常は、腫瘍性シグナル伝達や免疫・発生過程の変調としばしば関連しており、経路のリワイヤリング機構を解析するための研究ノードとして広く用いられています。

PTEN CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTENの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PTEN CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTEN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTEN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PTENの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTEN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPTEN依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTEN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPTEN経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。