PSM Plasmide Double Nickase (h): sc-401947-NIC

FOLH1 codifica l’antigene di membrana специфico della prostata (PSMA), una metallopeptidasi transmembrana di tipo II con attività di idrolasi dei folati e NAALADasi, che regola la disponibilità extracellulare di glutammato e il metabolismo dei folati. Nei tessuti umani, PSMA supporta l’elaborazione dei nutrienti e la segnalazione scindendo folati poliglutammati e neuropeptidi, collegandosi così alla gestione degli amminoacidi e alla comunicazione metabolica sulla superficie cellulare. L’espressione e l’attività di FOLH1/PSMA sono comunemente studiate in contesti epiteliali e neurali, dove le variazioni possono influenzare adesione e migrazione cellulare, nonché la segnalazione nel microambiente. La biologia deregolata di FOLH1 è spesso analizzata in relazione a programmi oncogenici e alla neurobiologia, rendendolo un locus utile per dissezionare la funzione degli enzimi di membrana e gli effetti sulle vie a valle.

PSM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FOLH1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FOLH1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FOLH1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FOLH1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.