Psf2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405023-ACT

O GINS2 humano codifica a Psf2, uma subunidade essencial do complexo GINS que coopera com a CDC45 e a helicase MCM2–7 para formar o replissoma CMG, necessário para a iniciação e o alongamento da replicação do DNA. A Psf2 sustenta o disparo de origens, a progressão da forquilha de replicação e a integridade do checkpoint da fase S, ligando sua atividade à manutenção da estabilidade do genoma e à progressão coordenada do ciclo celular. A expressão desregulada de GINS2 tem sido associada a programas proliferativos e a fenótipos de estresse replicativo observados em múltiplos contextos de pesquisa em doenças, incluindo a biologia do câncer. Como fator central de replicação, a Psf2 é frequentemente estudada em vias que regulam respostas a dano no DNA, dinâmica da cromatina durante a fase S e estresse transcricional associado à replicação.

Psf2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GINS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Psf2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GINS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GINS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Psf2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GINS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Psf2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Psf2 em células tumorais com expressão de GINS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.