PRX IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424704

概要

Prdx4は、ペルオキシレドキシンIV（PRX IV）をコードします。PRX IVは小胞体（ER）に局在するチオール依存性のペルオキシダーゼで、過酸化水素および有機ヒドロペルオキシドを還元し、分泌タンパク質や膜タンパク質を産生する細胞におけるレドックス恒常性の維持に寄与します。ER内腔では、PRX IVが過酸化物の解毒とジスルフィド結合形成を結び付けることで酸化的タンパク質フォールディングのあり方を調整し、ERストレス時のプロテオスタシスやアンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナルにも影響します。局所的な活性酸素種（ROS）を制御することで、PRX IVは炎症、細胞生存、代謝適応に関わるレドックス感受性経路を調節し得ます。ERのレドックスバランスやPRX IV活性の破綻は、がん生物学、代謝性疾患、炎症プロセスに関連する酸化ストレス関連表現型と結び付けられており、Prdx4はマウス系での機構研究に有用な結節点となります。

PRX IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPrdx4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Prdx4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Prdx4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PRX IVタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PRX IVシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Prdx4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PRX IVの機能に不可欠なPrdx4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Prdx4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PRX IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPRX IV CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Prdx4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PRX IV HDRプラスミド（m）および PRX IV HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPrdx4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPrdx4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。