Protein S CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401491

概要

PROS1はプロテインSをコードしている。プロテインSはビタミンK依存性の糖タンパク質であり、活性化プロテインCの主要な抗凝固補因子として機能し、第Va因子および第VIIIa因子のタンパク質分解による不活化を促進してトロンビン産生を抑制する。凝固カスケードにおける役割にとどまらず、プロテインSはTAM受容体型チロシンキナーゼ（TYRO3、AXL、MERTK）のリガンドとしても働き、ホスファチジルセリン依存的なエフェロサイトーシス（死細胞の貪食・除去）や、自然免疫シグナルの調節を支える。これらの経路を介して、PROS1は止血と炎症の恒常性、ならびにアポトーシス細胞の除去を結び付けている。プロテインSの遺伝的欠損や活性低下は、凝固調節の破綻と血栓傾向に関連し、またTAMシグナルの変化は免疫調節異常や、がん関連の微小環境における表現型と関連付けられている。

Protein S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPROS1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PROS1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PROS1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Protein Sタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Protein Sシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PROS1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Protein Sの機能に不可欠なPROS1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PROS1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Protein S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびProtein S CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PROS1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Protein S HDRプラスミド（h）および Protein S HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPROS1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPROS1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。