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Prohibitin双切口酶质粒(m) | sc-422218-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Prohibitin双切口酶质粒(m2) | sc-422218-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Phb 基因编码抑制素(prohibitin,PHB),这是一种在进化上高度保守的支架蛋白,富集于线粒体内膜,并与 PHB2 形成高分子量复合物,以稳定呼吸链组分并维持嵴结构。抑制素影响线粒体蛋白稳态、膜电位以及线粒体自噬,并与调控氧化磷酸化、活性氧(ROS)稳态和细胞周期控制的通路相整合。通过这些作用,PHB 参与代谢适应与应激反应,而这些过程常在线粒体相关疾病背景下发生紊乱,例如神经退行性变、心脏代谢功能障碍以及肿瘤生物学。因而,Phb 常被用作研究线粒体质量控制以及细胞器功能与核内转录程序之间信号串扰的重要节点。
Prohibitin 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Phb 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Phb内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Phb的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Phb基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。