Profilin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403456-ACT

PFN2 codifica a profilina-2, uma proteína ligante de monómeros de actina que regula a dinâmica da polimerização da actina e liga a remodelação do citoesqueleto ao tráfego de membranas e à transdução de sinal. A profilina-2 coordena interações com ligandos que contêm poli-L-prolina e com fosfoinositídeos, sustentando processos como o crescimento de neuritos, a função sináptica, a motilidade celular e a endocitose. Por meio do seu papel na organização do citoesqueleto de actina, a PFN2 influencia vias que governam a adesão, a migração e a conectividade neuronal. A desregulação da remodelação de actina dependente de profilina-2 tem sido investigada no contexto de fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos, bem como de comportamento celular invasivo.

Profilin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PFN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Profilin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PFN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PFN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Profilin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PFN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Profilin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Profilin-2 em células tumorais com expressão de PFN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.