PRMT1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402249-NIC

PRMT1は、タンパク質アルギニンメチル基転移酵素1（protein arginine methyltransferase 1）をコードしており、ヒストンならびに多数のRNA結合タンパク質やシグナル伝達タンパク質上のアルギニン残基の非対称ジメチル化を担う主要なI型PRMTです。クロマチンアクセシビリティ、転写、RNAプロセシング、DNA損傷応答の制御を通じて、PRMT1は細胞周期制御、アポトーシス、分化などの中核的プロセスに寄与します。PRMT1依存的メチル化は、主要な制御因子のタンパク質間相互作用や細胞内局在を調節することで、エピジェネティクスおよびストレス応答経路と連携します。PRMT1活性の破綻やアルギニンメチル化パターンの異常は、がん性の転写プログラム、炎症、神経変性疾患の分子機構といった文脈で頻繁に研究されています。

PRMT1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PRMT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PRMT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PRMT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PRMT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。