PRL-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402331-ACT

PTP4A3 codifica a PRL-3, uma fosfatase de tirosina proteica prenilada que se localiza em membranas intracelulares e modula redes de sinalização dependentes de fosforilação que controlam a migração celular, a remodelação do citoesqueleto e a proliferação. A PRL-3 tem sido associada à regulação de vias que incluem PI3K/AKT, MAPK/ERK e a sinalização de GTPases da família Rho, influenciando a dinâmica de adesão e fenótipos invasivos. A expressão desregulada de PTP4A3/PRL-3 é frequentemente estudada no contexto da progressão tumoral e da biologia da metástase, na qual se correlaciona com programas alterados de sobrevivência e motilidade. Como alvo gênico humano, PTP4A3 é utilizado para investigar a reprogramação de circuitos de sinalização e de estados transcricionais dirigida por fosfatases, relevante para a transformação oncogênica e a adaptação ao microambiente.

PRL-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTP4A3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRL-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTP4A3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTP4A3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRL-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTP4A3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRL-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRL-3 em células tumorais com expressão de PTP4A3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.