Partículas Lentivirales de Activación (h) Prickle4: sc-412059-LAC

PRICKLE4 codifica Prickle4, un regulador conservado de la señalización de polaridad planar celular que ayuda a coordinar comportamientos celulares direccionales modulando la actividad de la vía Wnt no canónica/PCP. Mediante interacciones con componentes centrales de la PCP y reguladores citosqueléticos aguas abajo, Prickle4 puede influir en la polaridad, la adhesión y la motilidad celulares, procesos relevantes para la organización tisular y la morfogénesis. La alteración de la señalización PCP se asocia con anomalías del desarrollo y fenotipos vinculados al cáncer, como migración e invasión aberrantes, lo que convierte a PRICKLE4 en un nodo útil para estudios mecanísticos de vías. En modelos celulares humanos, el análisis de la expresión de PRICKLE4 y de los programas transcripcionales aguas abajo puede aclarar cómo las señales PCP se integran con las dinámicas de las pequeñas GTPasas y del citoesqueleto.

Las partículas de activación lentiviral Prickle4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRICKLE4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Prickle4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRICKLE4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Prickle4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRICKLE4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.