Pre-TCRα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422473
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Pre-TCRα O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Pre-TCRα, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Pre-TCRα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422473 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ptcra codifica a pré-cadeia alfa do receptor de células T (pre-TCRα) do camundongo, um componente essencial do complexo pre-TCR expresso em timócitos em desenvolvimento. A pre-TCRα se associa à TCRβ para formar um receptor de sinalização que promove a seleção β, impulsionando proliferação, sobrevivência e a progressão do estágio duplo-negativo para o duplo-positivo. A sinalização do pre-TCR envolve cascatas de quinases e programas transcricionais ligados à diferenciação de timócitos, incluindo vias dependentes de LCK/ZAP70 e sinalização a jusante por MAPK e PI3K–AKT. Checkpoints desregulados associados a PTCRA podem perturbar o desenvolvimento de células T e a formação do repertório, oferecendo um ponto de entrada mecanístico para estudar imunodeficiência e fisiopatologia conduzida por células T em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Pre-TCRα (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ptcra em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ptcra, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ptcra na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Pre-TCRα.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ptcra para a investigação da sinalização de Pre-TCRα, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ptcra críticos para a função Pre-TCRα
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ptcra para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Pre-TCRα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Pre-TCRα Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ptcra. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Pre-TCRα Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Pre-TCRα (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ptcra para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ptcra definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.