PPP1R12C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412332-ACT

PPP1R12C codifica a MYPT3, uma subunidade regulatória da fosfatase de miosina que direciona a proteína fosfatase 1 (PP1) para a miosina II e substratos relacionados, modulando a contratilidade actomiosínica. Ao moldar a dinâmica de fosforilação da cadeia leve da miosina, a PPP1R12C contribui para a organização do citoesqueleto, a adesão celular, a motilidade e vias de mecanotransdução que influenciam a arquitetura tecidual e a função de barreira. A regulação alterada da desfosforilação dependente de PP1 tem sido associada à migração celular desregulada e à sinalização contrátil, processos comumente implicados na biologia cardiovascular e do câncer. Como um nó que conecta o direcionamento de fosfatases à contratilidade impulsionada por RhoA/ROCK, a PPP1R12C é relevante para estudos de redes de sinalização por fosforilação e fenótipos dependentes do citoesqueleto.

PPP1R12C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP1R12C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PPP1R12C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP1R12C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP1R12C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PPP1R12C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP1R12C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PPP1R12C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PPP1R12C em células tumorais com expressão de PPP1R12C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.