PPM1H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435618

Visão geral

Ppm1h codifica a PPM1H, uma fosfatase de serina/treonina da família PP2C dependente de Mg2+/Mn2+ que modula a saída de sinalização ao desfosforilar proteínas-alvo envolvidas em respostas ao estresse celular e no controle do crescimento. Por meio da atenuação, mediada por fosfatase, de vias de quinases, a PPM1H contribui para a regulação da homeostase de fosforilação, que influencia a progressão do ciclo celular, a sobrevivência e programas de diferenciação. Em sistemas murinos, a PPM1H tem sido utilizada para investigar como a atividade de fosfatase molda a dinâmica das vias e fenótipos específicos de tecidos, fornecendo ligações mecanísticas entre redes de fosforilação alteradas e características complexas. A sinalização de fosfatases desregulada é amplamente relevante para modelos de sinalização oncogênica, inflamação e neurobiologia, tornando Ppm1h um nó útil para estudar o redirecionamento de vias e relações genótipo–fenótipo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PPM1H (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ppm1h em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ppm1h, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ppm1h na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PPM1H.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ppm1h para a investigação da sinalização de PPM1H, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ppm1h críticos para a função PPM1H
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ppm1h para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PPM1H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PPM1H Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ppm1h. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PPM1H Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PPM1H (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ppm1h para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ppm1h definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.