PPARα Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400238-ACT

PPARα (recettore alfa attivato dai proliferatori dei perossisomi) è un fattore di trascrizione appartenente alla famiglia dei recettori nucleari, attivato da ligandi, che coordina il catabolismo lipidico e l’omeostasi energetica nelle cellule umane. Regola programmi genici che controllano la β‑ossidazione mitocondriale e perossisomiale, il trasporto degli acidi grassi, la chetogenesi e il metabolismo delle lipoproteine, integrando segnali metabolici con output trascrizionali tramite gli elementi di risposta ai PPAR. L’attività di PPARα interagisce con le vie di segnalazione di AMPK e dell’insulina e modula l’espressione di geni infiammatori attraverso il crosstalk con NF‑κB e altri recettori nucleari. La disregolazione delle vie associate a PPARA è frequentemente studiata in contesti quali sindrome metabolica, dislipidemia, steatosi epatica non alcolica e rimodellamento cardiometabolico, rendendolo un nodo centrale per studi meccanicistici sullo stress cellulare indotto dai lipidi.

PPARα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PPARA senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PPARα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PPARA nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PPARA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PPARα. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PPARA nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PPARα nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PPARα nelle cellule tumorali con espressione di PPARA silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.