PP2Cγ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404206-ACT

PPM1G codifica a fosfatase proteica de serina/treonina PP2Cγ, uma enzima da família PP2C que regula vias de sinalização dependentes de fosforilação e processos nucleares. A PP2Cγ tem sido associada ao controle de programas de expressão gênica por meio de efeitos sobre fatores ligados à cromatina, processamento de RNA e redes de fosforilação relacionadas ao ciclo celular, ajudando a ajustar respostas ao estresse e a proliferação. Ao contrabalançar a atividade de quinases, PPM1G contribui para a manutenção da homeostase de fosfoproteínas, o que influencia a integridade do genoma e os resultados transcricionais. Alterações na regulação de vias associadas à PP2Cγ foram observadas em contextos relevantes para sinalização oncogênica, respostas a dano no DNA e transições aberrantes de estado celular, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos.

PP2Cγ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPM1G sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PP2Cγ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPM1G em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPM1G, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PP2Cγ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPM1G nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PP2Cγ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PP2Cγ em células tumorais com expressão de PPM1G silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.