PP2B-B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422386

概要

Ppp3r1は、PP2B（カルシニューリン）の制御サブユニットB1（カルシニューリンB1）をコードしており、カルシニューリンのホスファターゼ活性を安定化し、調節するために不可欠なCa2+結合パートナーです。Ca2+/カルモジュリン依存性シグナル伝達を介して、カルシニューリンはNFAT転写因子などの基質の脱リン酸化を制御し、カルシウムフラックスを、免疫活性化・神経可塑性・筋リモデリングを司る転写プログラムへと結び付けます。マウスモデルでは、PPP3R1依存性シグナル伝達はT細胞受容体応答、シナプス機能、ならびに心肥大に関連するリモデリングを制御する経路と交差しており、炎症、神経生物学、ストレス適応シグナル伝達の研究において重要です。カルシニューリン活性の破綻は、病的リモデリングや免疫機能障害に広く関与するとされ、PP2B-B1は疾患関連システムにおける経路解明のための機序上の結節点となります。

PP2B-B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpp3r1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppp3r1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppp3r1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PP2B-B1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PP2B-B1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppp3r1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PP2B-B1の機能に不可欠なPpp3r1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppp3r1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PP2B-B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPP2B-B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppp3r1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PP2B-B1 HDRプラスミド（m）および PP2B-B1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpp3r1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpp3r1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。