POPX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406536

概要

PPM1Fは、セリン／スレオニン型タンパク質ホスファターゼであるPOPX2（PP2Cファミリー）をコードしており、細胞骨格ダイナミクスや細胞周期関連プロセスを制御するキナーゼ経路に拮抗して、リン酸化依存的シグナル伝達を調節します。POPX2は、Rho GTPase共役ネットワークやストレス応答性ネットワーク内の特定基質を脱リン酸化することで、アクチン再構築および細胞運動性の調節に関与することが示唆されており、接着や指向性のある遊走に影響するシグナルを統合します。こうしたシグナル結節の調整を通じて、POPX2はモデル系において増殖、生存、浸潤性といった細胞応答の形成に寄与し得ます。ホスファターゼ活性の破綻やPPM1F/POPX2発現の変化は、異常なリン酸化シグナルが組織恒常性を乱すがん生物学関連の状況や、その他の疾患領域でも報告されています。

POPX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPPM1F遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PPM1F内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PPM1Fのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、POPX2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、POPX2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PPM1F欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• POPX2の機能に不可欠なPPM1Fエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PPM1Fゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• POPX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPOPX2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PPM1F遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  POPX2 HDRプラスミド（h）および POPX2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPPM1Fホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPPM1F標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。