Plasmide CRISPR/Cas9 KO POMC (r): sc-437377

Présentation

La pro-opiomélanocortine (POMC) est une prohormone neuroendocrinienne précurseur qui est traitée par protéolyse en plusieurs peptides bioactifs, notamment l’ACTH et les mélanocortines, lesquels coordonnent la signalisation de l’axe du stress, l’équilibre énergétique, la pigmentation et la nociception. Dans les voies hypothalamiques et hypophysaires du rat, les peptides dérivés de la POMC agissent via les récepteurs des mélanocortines et intègrent des signaux nutritionnels et hormonaux afin de réguler le comportement alimentaire et l’homéostasie métabolique. L’expression de la POMC est étroitement contrôlée par des programmes transcriptionnels liés au développement et sensibles aux stimuli, et des altérations du processing ou de la signalisation de la POMC sont impliquées dans des phénotypes associés à l’obésité, des réponses dérégulées de l’axe HHS (hypothalamo-hypophyso-surrénalien) et des dysfonctionnements endocriniens. En tant que nœud central de la biosynthèse des neuropeptides et de la signalisation médiée par des RCPG, la POMC est largement utilisée pour étudier l’identité des cellules neuroendocriniennes, la maturation des peptides et la physiologie systémique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO POMC (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine POMC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de POMC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de POMC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le POMC plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le POMC plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le POMC plasmide HDR (r) et le POMC (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.