POLR3GL Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413599-ACT

Il gene umano **POLR3GL** codifica una piccola subunità dell’RNA polimerasi III che supporta la trascrizione di brevi RNA non codificanti, inclusi tRNA, rRNA 5S e altri RNA dipendenti da Pol III essenziali per la capacità di traduzione e l’omeostasi cellulare. **POLR3GL** contribuisce all’assemblaggio del complesso Pol III e all’inizio della trascrizione dipendente dal promotore, collegando la sua attività al controllo della crescita, all’adattamento allo stress e alle vie di segnalazione dell’immunità innata influenzate dagli RNA derivati da Pol III. La disregolazione dei programmi trascrizionali di Pol III è ampiamente rilevante per fenotipi proliferativi e dello sviluppo, rendendo **POLR3GL** un nodo utile per studiare come una produzione alterata di RNA non codificanti rimodelli le reti di espressione genica. Investigare la funzione di **POLR3GL** può chiarire i meccanismi che collegano l’attività di Pol III alla regolazione trascrizionale, alle esigenze di sintesi proteica e a stati cellulari associati a malattie.

POLR3GL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di POLR3GL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

POLR3GL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus POLR3GL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione POLR3GL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di POLR3GL. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus POLR3GL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da POLR3GL nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via POLR3GL nelle cellule tumorali con espressione di POLR3GL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.