POLR3B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406739

Descripción general

POLR3B codifica la segunda subunidad más grande de la ARN polimerasa III, una enzima multisubunidad responsable de la transcripción de pequeños ARN no codificantes, incluidos los ARNt, el ARNr 5S y otros ARN cortos necesarios para la traducción y el crecimiento celular. Mediante la regulación de la producción de la Pol III, POLR3B influye en la biogénesis de ribosomas, la proteostasis y la adaptación metabólica, integrando señales sensibles a nutrientes y al estrés con la capacidad biosintética. La alteración de la transcripción por Pol III afecta la detección inmunitaria innata de ácidos nucleicos citosólicos y la homeostasis transcripcional en sentido amplio tanto en estados celulares proliferativos como diferenciados. Las variantes patogénicas en POLR3B se asocian con trastornos del espectro de leucodistrofias relacionadas con la Pol III y con fenotipos del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un gen clave para estudiar la disfunción de la maquinaria transcripcional en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO POLR3B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POLR3B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POLR3B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POLR3B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína POLR3B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POLR3B para la investigación de la señalización de POLR3B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de POLR3B críticos para la función de POLR3B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POLR3B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido POLR3B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido POLR3B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POLR3B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR POLR3B (h) y el plásmido HDR POLR3B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POLR3B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POLR3B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.