POLR3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406739

概要

POLR3Bは、tRNA、5S rRNA、その他翻訳や細胞増殖に必要な短鎖RNAなどの小分子非コードRNAの転写を担う多サブユニット酵素であるRNAポリメラーゼIIIの、第2最大サブユニットをコードします。Pol IIIの産生量を制御することを通じて、POLR3Bはリボソーム生合成、プロテオスタシス、代謝適応に影響を与え、栄養やストレスに応答するシグナル伝達を生合成能力と統合します。Pol III転写の攪乱は、細胞質核酸に対する自然免疫のセンシングや、増殖状態および分化状態にある細胞におけるより広範な転写恒常性にも影響します。POLR3Bの病的バリアントは、Pol III関連白質ジストロフィーのスペクトラム障害および神経発達表現型と関連しており、ヒト細胞における転写機構の機能不全を研究する上で重要な遺伝子です。

POLR3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPOLR3B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、POLR3B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、POLR3Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、POLR3Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、POLR3Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、POLR3B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• POLR3Bの機能に不可欠なPOLR3Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、POLR3Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• POLR3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPOLR3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、POLR3B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  POLR3B HDRプラスミド（h）および POLR3B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPOLR3Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPOLR3B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。