Plásmido CRISPR de Activación (h) POLR2J1: sc-409187-ACT

POLR2J1 codifica una subunidad de la ARN polimerasa II, la enzima central responsable de sintetizar ARNm y muchos ARN no codificantes en las células humanas. POLR2J1 contribuye al ensamblaje y la función del complejo Pol II y respalda los programas de iniciación y elongación de la transcripción que dan forma a la expresión génica global, el procesamiento del ARN y las respuestas celulares a señales. A través de su papel en la maquinaria basal de transcripción, POLR2J1 es relevante para vías que controlan la proliferación, la adaptación al estrés y los estados de diferenciación, que dependen de una producción transcripcional estrechamente regulada. La desregulación de factores asociados a la Pol II se observa con frecuencia en el cáncer y otros trastornos del control de la expresión génica, lo que convierte a POLR2J1 en un nodo útil para estudios mecanísticos de la homeostasis transcripcional.

POLR2J1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POLR2J sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

POLR2J1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POLR2J en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POLR2J, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de POLR2J1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POLR2J y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de POLR2J1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía POLR2J1 en células tumorales con expresión de POLR2J silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.