PNUTS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424580

Panoramica

Il gene murino Ppp1r10 codifica PNUTS (subunità regolatrice 10 della protein fosfatasi 1), un’impalcatura nucleare che indirizza PP1 verso la cromatina e complessi associati all’RNA, coordinando il controllo dell’espressione genica dipendente dalla fosforilazione. PNUTS partecipa alla regolazione della trascrizione, alla segnalazione della risposta al danno al DNA e al controllo dei checkpoint del ciclo cellulare, influenzando processi come la gestione dello stress replicativo e il mantenimento della stabilità del genoma. Attraverso interazioni con fattori coinvolti nell’organizzazione della cromatina e nel processamento dell’RNA, PNUTS contribuisce ad accoppiare le dinamiche di fosforilazione all’allungamento trascrizionale e alla biogenesi dell’RNA. La disregolazione della segnalazione PP1–PNUTS è stata associata a programmi proliferativi alterati e a fenotipi di instabilità genomica, rilevanti per studi meccanicistici su vie correlate al cancro e sulla neurobiologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PNUTS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp1r10 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp1r10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp1r10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PNUTS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp1r10 per lo studio della segnalazione di PNUTS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppp1r10 critici per la funzione di PNUTS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp1r10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PNUTS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PNUTS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp1r10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PNUTS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PNUTS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp1r10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp1r10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.