PMPCB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405207

概要

PMPCBは、ミトコンドリア・マトリックスへ輸入された核コードタンパク質から、N末端の標的化プレシーケンスを切断するヘテロ二量体MPP複合体の中核構成因子である、ミトコンドリア・プロセシング・ペプチダーゼ（MPP）βサブユニットをコードします。酸化的リン酸化関連酵素や代謝酵素の成熟を可能にすることで、PMPCBはミトコンドリアのプロテオスタシス、バイオエネルギー恒常性、ならびにミトコンドリア品質管理に関連するストレス応答を支えます。ミトコンドリアのプレシーケンス処理が破綻すると、呼吸鎖機能の低下、プロテオトキシックストレスの増大、アポトーシスおよびマイトファジーのシグナル伝達の変化を引き起こし得ます。PMPCBの機能不全やミトコンドリアタンパク質プロセシングの攪乱は、神経発達表現型やミトコンドリア病の機序と関連付けられており、エネルギー代謝およびオルガネラ機能障害の研究において重要な対象となります。

PMPCB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPMPCB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PMPCB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PMPCBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PMPCBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PMPCBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PMPCB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PMPCBの機能に不可欠なPMPCBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PMPCBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PMPCB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPMPCB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PMPCB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PMPCB HDRプラスミド（h）および PMPCB HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPMPCBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPMPCB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。