Plasmide Double Nickase (m) PMM2: sc-424790-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) PMM2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PMM2 Double Nickase (m) et le plasmide PMM2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Pmm2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) PMM2 | sc-424790-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) PMM2 | sc-424790-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin *Pmm2* code la phosphomannomutase 2 (PMM2), une enzyme cytosolique qui interconvertit le mannose-6-phosphate et le mannose-1-phosphate afin de soutenir la biosynthèse du GDP-mannose et des oligosaccharides liés au dolichol. Cette activité relie *Pmm2* à la N‑glycosylation et, plus largement, aux processus d’assemblage des glycanes qui influencent le repliement des protéines, leur trafic intracellulaire et les interactions avec la matrice extracellulaire. Une altération de la fonction de PMM2 perturbe la protéostasie et les profils de glycosylation à la surface cellulaire, affectant l’homéostasie de la voie sécrétoire et la signalisation intercellulaire. *Pmm2* est donc largement étudié dans des modèles de troubles congénitaux de la glycosylation ainsi que dans des analyses à l’échelle des systèmes portant sur la régulation, dépendante des glycanes, du développement, de l’immunité et du métabolisme.
PMM2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pmm2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pmm2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pmm2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pmm2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.