Plásmido CRISPR de Activación (h) plexin-C1: sc-403944-ACT

PLXNC1 codifica la plexina‑C1, un receptor transmembrana para ligandos de semaforina que regula la señalización dependiente de contacto, la remodelación del citoesqueleto y el movimiento celular direccional. La plexina‑C1 participa en vías de semaforina/plexina que acoplan señales guía extracelulares a la actividad de GTPasas de la familia Rho en el interior de la célula, influyendo en la dinámica de adhesión, el comportamiento de las células inmunitarias y el patrón tisular. Se ha descrito una expresión alterada de PLXNC1 en contextos asociados con migración desregulada e interacciones con el microambiente, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico en estudios de invasión, inflamación y comunicación cruzada entre el estroma y el sistema inmunitario. Como receptor humano con salidas de señalización pleiotrópicas, la plexina‑C1 se examina con frecuencia en vías que vinculan la señalización de guía mediada por receptores con la reprogramación transcripcional y fenotípica.

plexin-C1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLXNC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

plexin-C1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLXNC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLXNC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de plexin-C1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLXNC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de plexin-C1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía plexin-C1 en células tumorales con expresión de PLXNC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.