Plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC β2 (h): sc-400984

Présentation

PLCB2 code la phospholipase Cβ2 (PLCβ2), un effecteur associé à la membrane agissant en aval des récepteurs couplés aux protéines G, qui hydrolyse le PIP2 pour générer l’IP3 et le DAG, entraînant la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et l’activation de la PKC. Cet axe de signalisation régule la chimiotaxie, la dégranulation, la sécrétion et le remodelage du cytosquelette, en particulier dans les lignées hématopoïétiques où la PLCβ2 contribue à l’activation des cellules immunitaires et aux réponses inflammatoires. La PLCβ2 s’intègre aux voies GPCR–Gαq/11 et coordonne des programmes transcriptionnels dépendants du calcium ainsi que le trafic vésiculaire. Une dérégulation de la signalisation liée à PLCβ2 a été associée à des fonctions leucocytaires aberrantes et à des phénotypes prolifératifs dans des modèles de maladies hématologiques, ce qui soutient son étude dans l’immunité et les réseaux de signalisation associés au cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC β2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PLCB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PLCB2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PLCB2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PLC β2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PLCB2 pour l'étude de la signalisation de PLC β2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PLCB2 essentiels à la fonction de PLC β2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PLCB2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PLC β2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PLC β2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PLCB2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PLC β2 plasmide HDR (h) et le PLC β2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PLCB2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PLCB2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.