PLAC8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405093-ACT

PLAC8（placenta associated 8）は、システインに富む小型タンパク質をコードしており、細胞分化の制御、上皮―間葉系の可塑性、および自然免疫関連シグナル伝達の調節に関与するとされています。ヒト細胞においてPLAC8は、オートファジー、酸化還元バランス、細胞骨格リモデリングに関連する経路を含む、増殖プログラムやストレス応答プログラムの調節に関連づけられてきました。PLAC8の発現変化は複数の疾患状況で報告されており、とくにがんでは、浸潤や転移に関連する表現型、ならびに腫瘍微小環境との相互作用の変化と相関することが示されています。これらの特性により、PLAC8は転写制御の機構解析、細胞状態遷移、および状況依存的なシグナル出力の研究において有用な結節点となります。

PLAC8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLAC8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PLAC8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLAC8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLAC8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PLAC8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLAC8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPLAC8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLAC8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPLAC8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。