pki α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416391

概要

PKIA は、cAMP 依存性プロテインキナーゼA（PKA）の触媒サブユニットに結合してキナーゼ活性を抑制する、熱安定性のタンパク質キナーゼ阻害因子α（PKIα）をコードします。cAMP/PKA シグナル伝達を抑えることで、PKIα は転写制御、細胞周期の進行、代謝、ストレス応答を制御するリン酸化プログラムに影響を与え、CREB 依存的な遺伝子発現の調節にも関与します。さらに PKIα は、キナーゼの局在やシグナルの振幅に影響する相互作用を介して、PKA シグナル伝達の空間的制御にも寄与します。cAMP/PKA 経路活性の破綻や PKIA 発現の変化は、腫瘍生物学、内分泌シグナル、神経機能に関連する状況で報告されており、経路中心の機構解析研究における標的としての有用性を裏付けています。

pki α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPKIA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PKIA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PKIAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、pki αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、pki αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PKIA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• pki αの機能に不可欠なPKIAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PKIAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• pki α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびpki α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PKIA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  pki α HDRプラスミド（h）および pki α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPKIAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPKIA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。