Plasmide Double Nickase (h) PKC lambda/iota: sc-402111-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PKC lambda/iota correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PKC lambda/iota Double Nickase (h) et le plasmide PKC lambda/iota Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRKCI. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PKC lambda/iota Antibody (E-7): sc-376344
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PKC lambda/iota | sc-402111-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PKC lambda/iota | sc-402111-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCI code l’isoforme atypique de la protéine kinase C PKC lambda/iota (PKCι), une kinase sérine/thréonine qui constitue un élément central du complexe de polarité PAR avec PAR3 et PAR6. PKC lambda/iota intègre des signaux issus des GTPases de la famille Rho et des voies des facteurs de croissance afin de réguler la polarité apico-basale, l’assemblage des jonctions serrées, la division cellulaire asymétrique et la migration directionnelle. Par la phosphorylation de substrats impliqués dans la polarité et le trafic intracellulaire, elle influence le remodelage du cytosquelette et la dynamique des vésicules qui façonnent l’organisation épithéliale. Une dérégulation de la signalisation PRKCI/PKC lambda/iota a été associée à une polarité altérée et à un comportement invasif dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation oncogénique et de l’architecture tissulaire.
PKC lambda/iota Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRKCI dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRKCI. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRKCI. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRKCI.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.