PKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422263

概要

Prkciは、非典型プロテインキナーゼC（aPKC）アイソフォームであるPKC λ/ιをコードする遺伝子で、PAR3–PAR6などの極性複合体の下流で機能するセリン/スレオニンキナーゼです。Prkciは、頂端–基底極性の確立、タイトジャンクションの構築、非対称細胞分裂に寄与します。PKC λ/ιは、PI3Kおよび低分子量GTPaseにより制御されるシグナルからの入力を統合し、細胞骨格リモデリング、小胞輸送、上皮形態形成を協調的に制御します。マウスモデルでは、Prkci活性の変化が組織構築の破綻や、発生および免疫細胞プログラムの異常と関連づけられており、上皮の完全性、分化、ストレス応答性シグナル伝達の研究において重要な標的となります。また、極性制御と増殖制御経路における中心的役割から、Prkciの機能異常は、がん生物学や代謝研究で頻繁に検討される機序とも結びついています。

PKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPrkci遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Prkci内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Prkciのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PKC lambda/iotaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PKC lambda/iotaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Prkci欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PKC lambda/iotaの機能に不可欠なPrkciエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Prkciゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPKC lambda/iota CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Prkci遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PKC lambda/iota HDRプラスミド（m）および PKC lambda/iota HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPrkciホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPrkci標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。