Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
PKC epsilon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422261
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PKC epsilon O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PKC epsilon, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PKC epsilon Anticorpo (E-5): sc-1681
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PKC epsilon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422261 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Prkce codifica a proteína quinase C épsilon (PKCε), uma quinase de serina/treonina responsiva ao diacilglicerol, que integra sinais provenientes de fosfolipídios e de vias acionadas por receptores para moldar o comportamento celular. A PKCε modula redes de fosforilação que controlam a remodelação do citoesqueleto, o tráfego vesicular e programas de sobrevivência celular, e é comumente associada aos desfechos de sinalização MAPK/ERK e PI3K–AKT em múltiplos tipos celulares. Em sistemas murinos, a atividade de Prkce é estudada no contexto de respostas ao estresse, sinalização inflamatória e remodelação tecidual, onde alterações na sinalização de PKCε podem influenciar fenótipos relevantes para a biologia metabólica e cardiovascular, bem como processos associados a tumores. Essas conexões funcionais fazem de Prkce um nó útil para dissecar a comunicação cruzada entre vias dependentes de quinases e a plasticidade celular dependente de sinais.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PKC epsilon (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Prkce em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Prkce, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Prkce na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PKC epsilon.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Prkce para a investigação da sinalização de PKC epsilon, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Prkce críticos para a função PKC epsilon
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Prkce para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PKC epsilon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PKC epsilon Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Prkce. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PKC epsilon Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PKC epsilon (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Prkce para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Prkce definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.