PKC beta Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400263-LAC

PRKCB codifica a proteína quinase C beta (PKCβ), uma quinase de serina/treonina responsiva a diacilglicerol e Ca²⁺ que conecta a sinalização da fosfolipase C induzida por receptores a programas de fosforilação que controlam proliferação, diferenciação, migração e sobrevivência. A PKCβ atua a jusante de receptores de antígeno e de receptores Fc para moldar a ativação de células B e a sinalização da imunidade inata, e modula respostas endoteliais e plaquetárias por meio da regulação da dinâmica do citoesqueleto e da secreção. Na biologia do câncer, a sinalização dependente de PRKCB intersecciona as saídas das vias MAPK/ERK, NF-κB e PI3K que influenciam transições de estado celular e respostas ao estresse, enquanto a desregulação também tem sido associada a fisiopatologia inflamatória e vascular. Essas características tornam PRKCB um nó útil para investigar mecanismos de transdução de sinal, crosstalk entre vias dependente de fosforilação e programas transcricionais específicos de contexto em modelos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PKC beta (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PRKCB numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PKC beta (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PRKCB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PKC beta. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PRKCB e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.