PKA IIβ reg Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402536-ACT

PRKAR2B codifica a subunidade regulatória IIβ da proteína quinase A (PKA) dependente de AMPc, um modulador central da atividade da subunidade catalítica e da localização subcelular em resposta ao AMPc. Por meio de sinalização compartimentalizada, frequentemente coordenada por proteínas ancoradoras de A-quinase (AKAPs), o PRKAR2B ajuda a moldar a dinâmica de fosforilação que influencia o metabolismo, a organização do citoesqueleto, programas transcricionais e a sinalização sináptica. Vias dependentes de PKA se cruzam com a sinalização por GPCR, a regulação gênica mediada por CREB e redes responsivas ao estresse que controlam a proliferação e a diferenciação celulares. A desregulação da sinalização AMPc/PKA envolvendo PRKAR2B tem sido associada na literatura a fenótipos metabólicos alterados e a processos neurocomportamentais, reforçando sua relevância para o estudo da integração de sinais em contextos associados a doenças.

PKA IIβ reg O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRKAR2B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PKA IIβ reg O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRKAR2B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRKAR2B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PKA IIβ reg. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRKAR2B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PKA IIβ reg no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PKA IIβ reg em células tumorais com expressão de PRKAR2B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.