PKA IIα regCRISPR激活质粒(h): sc-401080-ACT

PRKAR2A 编码 cAMP 依赖性蛋白激酶 A（PKA）的调节亚基 IIα，是调控激酶活性的关键因子：在缺乏 cAMP 时限制催化亚基活性，并对信号强度及其空间分隔（区室化）进行精细调节。通过与 AKAP 支架蛋白的锚定相互作用，PRKAR2A 有助于将 PKA 定位到特定的亚细胞微区，从而塑造磷酸化程序，进而控制代谢、细胞周期进程、转录反应以及突触信号传递。该 cAMP/PKA 轴与 GPCR 信号及 CREB 依赖的基因调控发生交叉，影响细胞分化与应激反应通路。PKA 信号失调以及调节亚基比例的改变与多种疾病背景下观察到的异常生长调控和通路重塑相关，因此支持对信号转导机制与细胞可塑性开展机制性研究。

PKA IIα reg CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PRKAR2A的表达。

PKA IIα reg CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PRKAR2A基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PRKAR2A转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PKA IIα reg表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PRKAR2A位点，并能够研究内源性位点上依赖于PKA IIα reg的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PRKAR2A表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PKA IIα reg通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。