非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO质粒 (m): sc-422400
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PKA Iα reg CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（m） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在PKA Iα reg基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：PKA Iα reg: sc-136231，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO质粒 (m) | sc-422400 | 20 µg | $397.00 |
概述
Prkar1a 编码 cAMP 依赖性蛋白激酶 A（PKA）的 I 型调节亚基 α（type I regulatory subunit alpha），它是一种关键的负性调控因子：通过结合催化亚基来抑制激酶活性，直到 cAMP 诱导全酶复合体解离。通过调控 PKA 信号传导，PRKAR1A 影响由 GPCR–腺苷酸环化酶–cAMP 通路下游触发的磷酸化程序，从而调节代谢、细胞周期进程、分化以及转录应答等过程。在小鼠系统中，扰动 Prkar1a 会改变 cAMP/PKA 通路的动力学特征，并对 CREB 调控的基因表达以及更广泛的信号串扰产生下游影响，其中包括与 MAPK 相关的过程。PRKAR1A 及 cAMP/PKA 信号的失调与内分泌及生长调控相关表型有关，因此它是研究体内及培养细胞中信号依赖性疾病机制的一个重要靶点。
PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO质粒（m）是一组旨在针对性地破坏mouse细胞系中Prkar1a基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对Prkar1a基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏Prkar1a开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使PKA Iα reg蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建Prkar1a缺失的细胞模型，用于PKA Iα reg信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 PKA Iα reg 功能至关重要的 Prkar1a 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 Prkar1a 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m) 和 PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO 质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别靶向 Prkar1a 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 PKA Iα reg HDR 质粒（m）编码的 HDR 供体构建体以及 PKA Iα reg HDR质粒（m2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由Prkar1a同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定Prkar1a靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。