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PiT1慢病毒激活颗粒(m) | sc-422988-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Slc20a1 编码 PiT1(SLC20A1),这是一种钠依赖性的无机磷酸盐(Pi)同向转运体,可促进细胞摄取磷酸盐,而磷酸盐摄取对于核苷酸生物合成、膜磷脂周转以及生物能量稳态维持是必需的。PiT1 参与磷酸盐感知与营养应答信号传导,并与代谢和细胞周期调控程序交叉,从而影响细胞增殖与存活。在发育过程和成体组织维持中,PiT1 活性与细胞分化状态及细胞外磷酸盐可用性相关;这些过程与矿物离子处理、组织重塑和代谢应激等研究密切相关。磷酸盐转运异常及 PiT1 相关通路已在骨与血管钙化生物学、肿瘤细胞代谢以及炎症微环境等背景中被研究,为探究磷酸盐依赖性表型的机制提供支持。
PiT1 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Slc20a1 表达。
PiT1 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Slc20a1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性PiT1表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Slc20a1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。