PISD CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404398-ACT

ホスファチジルセリン脱炭酸酵素（PISD）はミトコンドリア内膜に局在する酵素で、ホスファチジルセリンをホスファチジルエタノールアミンへ変換します。ホスファチジルエタノールアミンは、膜の曲率形成、ミトコンドリア動態、ならびにオートファジー関連の膜リモデリングに必要な主要リン脂質です。リン脂質の恒常性と、酸化的リン酸化に連動したミトコンドリア機能を支えることで、PISDは細胞のエネルギー代謝（バイオエナジェティクス）とストレス適応に寄与します。ホスファチジルエタノールアミンの利用可能量の変化は、ミトコンドリア機能障害、マイトファジー不全、さらにはより広範な代謝および神経発達に関わる表現型と関連づけられており、そのためPISDの制御はオルガネラの品質管理を研究する上で重要です。したがってPISDは、脂質代謝・膜輸送・ミトコンドリア維持を結び付ける経路の文脈で、しばしば解析対象となります。

PISD CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PISDの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PISD CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PISD 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPISD転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PISDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPISD遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPISD依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPISD発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPISD経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。