PILR-α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407310

Visão geral

PILRA (receptor alfa tipo 2 semelhante à imunoglobulina emparelhado) codifica um receptor inibitório de superfície celular enriquecido em populações mieloides, no qual reconhece ligantes de O-glicanos sialilados e transduz sinalização supressora por meio do recrutamento de fosfatases dependente de ITIM, como SHP-1/2. Ao atenuar programas de ativação associados a receptores Fc e a TLRs, o PILR-α contribui para a regulação dos limiares da imunidade inata, da produção de citocinas e das funções efetoras dos leucócitos. Essa atividade do tipo “checkpoint” conecta o PILR-α a vias que governam a homeostase inflamatória, a ativação de células apresentadoras de antígeno e mecanismos de evasão imune. Alterações na expressão de PILRA ou no engajamento de ligantes têm sido implicadas na neuroinflamação e na biologia de doenças infecciosas, tornando-o relevante para estudos de regulação mieloide em microambientes teciduais complexos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PILR-α (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PILRA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PILRA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PILRA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PILR-α.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PILRA para a investigação da sinalização de PILR-α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PILRA críticos para a função PILR-α
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PILRA para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PILR-α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PILR-α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PILRA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PILR-α Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PILR-α (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PILRA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PILRA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.