PILR-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407310

Übersicht

PILRA (paired immunoglobulin-like type 2 receptor alpha) kodiert einen inhibitorischen Zelloberflächenrezeptor, der besonders in myeloiden Zellpopulationen angereichert ist. Dort erkennt er sialylierte O‑Glykan‑Liganden und vermittelt eine dämpfende Signalübertragung über die ITIM‑abhängige Rekrutierung von Phosphatasen wie SHP‑1/2. Durch die Abschwächung Fc‑Rezeptor‑ und TLR‑assoziierter Aktivierungsprogramme trägt PILR‑α zur Regulation von Schwellenwerten der angeborenen Immunantwort, zur Zytokinproduktion und zu Effektor­funktionen von Leukozyten bei. Diese checkpoint‑ähnliche Aktivität verbindet PILR‑α mit Signalwegen, die die entzündliche Homöostase, die Aktivierung antigenpräsentierender Zellen und Mechanismen der Immunflucht steuern. Eine veränderte PILRA‑Expression oder Ligandenbindung wurde mit Neuroinflammation und der Biologie infektiöser Erkrankungen in Zusammenhang gebracht und ist daher relevant für Studien zur myeloiden Regulation in komplexen Gewebe‑Mikroumgebungen.

Das PILR-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PILRA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PILRA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PILRA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PILR-α-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PILRA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PILR-α-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PILRA-Exone abzielen, die für die PILR-α-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PILRA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PILR-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PILR-α CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PILRA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PILR-α HDR-Plasmid (h) und PILR-α HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PILRA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PILRA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.