PIKE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405344

概要

AGAP2は、成長因子受容体からの入力をホスホイノシチド3-キナーゼ（PI3K）シグナルへ結び付ける多ドメイン型GTPアーゼ／シグナル伝達アダプターであるPIKEをコードしており、その結果、増殖・生存・細胞骨格ダイナミクスを制御するPIP3依存性経路に影響を与える。PIKEは受容体型チロシンキナーゼ（RTK）カスケードの構成要素と相互作用し、AKTなどの下流エフェクターを調節することで、多様な細胞種におけるエンドサイトーシス、小胞輸送、アクチン再構成に関与する。AGAP2/PIKE活性の破綻は、PI3Kを中心とするネットワーク配線の攪乱を介して、がん化シグナルの変化、代謝ストレス応答、侵襲性表現型の亢進と関連付けられてきた。これらの性質により、AGAP2はヒト細胞モデルにおける成長・生存経路内のシグナル統合やフィードバック制御を解析する上で有用なノードとなる。

PIKE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAGAP2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AGAP2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AGAP2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PIKEタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PIKEシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AGAP2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PIKEの機能に不可欠なAGAP2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AGAP2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PIKE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPIKE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AGAP2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PIKE HDRプラスミド（h）および PIKE HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAGAP2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAGAP2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。