PIEZO1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-410555-LAC

PIEZO1 codifica um canal catiônico não seletivo mecanossensível que converte a tensão da membrana e o estresse de cisalhamento em influxo de Ca²⁺, permitindo mecanotransdução rápida em diversos tipos celulares. A sinalização de PIEZO1 molda processos dependentes de cálcio, incluindo a detecção do fluxo pelo endotélio, a remodelação do citoesqueleto, o controle do volume celular e respostas transcricionais a jusante ligadas à inflamação e à homeostase tecidual. Em eritrócitos e células vasculares, a atividade de PIEZO1 influencia o equilíbrio iônico e a estabilidade da membrana, conectando-se a vias que regulam o estado de hidratação e a mecanobiologia. A função desregulada de PIEZO1 tem sido associada a doenças hereditárias dos glóbulos vermelhos e a fenótipos linfáticos ou vasculares, tornando-o um alvo importante para estudar sinalização dependente de força em modelos de doença humana.

As Partículas de Ativação Lentivirais PIEZO1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PIEZO1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PIEZO1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PIEZO1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PIEZO1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PIEZO1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.