PIEZO1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410555-ACT

PIEZO1 codifica um grande canal catiônico mecanossensível que converte a tensão da membrana e o estresse de cisalhamento em influxo de cálcio, permitindo que as células transduzam estímulos mecânicos em sinais bioquímicos. Ele regula processos fundamentais, incluindo o tônus e o remodelamento vascular, o controle do volume dos eritrócitos, a mecanotransdução epitelial e endotelial e a ativação de células imunes, com efeitos a jusante em vias dependentes de cálcio, como a sinalização por calmodulina, o remodelamento do citoesqueleto e programas transcricionais associados a YAP/TAZ. A atividade alterada de PIEZO1 está ligada a distúrbios da hidratação e da morfologia das hemácias e à mecanotransdução desregulada na biologia cardiovascular e linfática. Essas propriedades fazem de PIEZO1 um alvo-chave para estudar como forças mecânicas moldam decisões de destino celular, a função de barreira e a homeostase tecidual.

PIEZO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIEZO1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PIEZO1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIEZO1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIEZO1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PIEZO1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIEZO1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PIEZO1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PIEZO1 em células tumorais com expressão de PIEZO1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.