PICH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407026

概要

ERCC6LはPICHをコードしており、PICHはSNF2ファミリーに属するATP依存性DNAトランスロカーゼで、アナフェーズ期に超微細DNAブリッジ（ultrafine DNA bridges）へ局在し、正確な染色体分配を促進します。PICHは、クロマチンを再構築し、絡み合った姉妹染色分体の解消を協調的に進めることで、DNA損傷応答およびデカテネーション経路と連携し、複製ストレス下でのゲノム安定性を支えます。有糸分裂の進行を制御し、染色体の誤分配を防ぐことにより、PICHは異数性やゲノム不安定性に関連する細胞の転帰にも影響します。ERCC6L/PICH活性の異常は増殖性の表現型と関連づけられており、がん生物学やその他のゲノム維持関連疾患の文脈で研究されています。

PICH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるERCC6L遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ERCC6L内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ERCC6Lのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PICHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PICHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ERCC6L欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PICHの機能に不可欠なERCC6Lエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ERCC6Lゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PICH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPICH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ERCC6L遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PICH HDRプラスミド（h）および PICH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはERCC6Lホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のERCC6L標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。