PIAS 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402407-ACT

PIAS1 codifica o inibidor proteico de STAT1 ativado (PIAS1), uma ligase E3 de SUMO e correagulador transcricional que modula a expressão gênica dependente de sinalização. O PIAS1 restringe as respostas a citocinas e interferons ao regular a atividade da família STAT e também influencia programas transcricionais associados a NF-κB e p53 por mecanismos dependentes de SUMOilação. Por meio dessas funções, contribui para o controle da inflamação, das respostas a danos no DNA e de decisões transcricionais ligadas ao ciclo celular. A expressão ou atividade desregulada de PIAS1 tem sido associada a sinalização imune aberrante e a estados transcricionais oncogênicos, tornando-o um nó útil para a dissecação de vias em modelos de células humanas.

PIAS 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PIAS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PIAS 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PIAS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PIAS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PIAS 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PIAS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PIAS 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PIAS 1 em células tumorais com expressão de PIAS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.